RPLC分离机制(C18、C8及C4)介绍(以多肽为例)

2018年1月1日16:59:23 发表评论 306 views

1、分离机制
RPLC根据吸附机制分离多肽,其分离原理主要是根据分子流经柱子时在固定相和流动相之间分配的平衡机制,多肽因分子太大而不能进入疏水固定相的内部,吸附在疏水表面,随着流动相浓度逐渐增大而逐渐被解吸。多肽进入色谱柱后,吸附在吸附剂表面,只有当溶剂大大一个特定的浓度才会被解吸,一旦解吸,他们向后流经色谱柱时仅与吸附剂表面存在微弱的相互作用。

2、 RPLC基于“疏水脚”的细微差异分离多肽分子
“疏水脚”的差异源于氨基酸序列和构象的差异,解吸发生在一个非常窄的有机试剂浓度范围内,这样多肽在解吸前可以较为完全的实现吸附保持,知道有机试剂浓度达到某个关键浓度后迅速被解吸。因为多肽对有机改性试剂的准确浓度高度敏感,因此RPLC对多肽的分离具有较高的选择性,才会有我们通常所看到的尖锐的分离峰。在有机改性剂的浓度发生变化时,小肽比小分子更容易解吸,但比蛋白质的解吸要慢,这说明了分离机制的非单一性。
3、RPLC色谱柱的特点及组成
RPLC色谱柱提供疏水性表面使多肽吸附,柱子是由不锈钢管组成,内部装满直径细小的球形吸附颗粒,通常为二氧化硅,表明经硅烷修饰后使之呈现疏水性,此外,合成的球形多聚物如聚苯乙烯-二乙烯苯等也可作为RPLC的吸附剂使用。下表为一些常见的RPLC填料:

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以上内容摘自《蛋白质组学中的蛋白质纯化手册》,并在此基础上进行部分修改。致敬经典!(色谱博士在《谱中人》→《致敬经典》中向VIP客户提供全书免费下载)

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